您所在的位置>>课程学习>>第七章 色谱法...
1教学要求

1. 掌握色谱法的系统适用性试验、含量测定方法和含量计算。掌握高效液相法的常用固定相、流动相、检测器,以及《中国药典》对仪器的要求。掌握常用气相色谱柱、检测器与适用范围,以及《中国药典》对色谱条件和仪器的要求。

2. 熟悉毛细管电泳法、分子排阻法和离子色谱法的原理与应用。

3. 了解手性高效液相法、超高效液相色谱法和常用色-质联用技术的原理与应用。

2学习重点

一、高效液相色谱法

1. 分类与定义

正相色谱(NP-HPLC)——固定相极性>流动相极性。常用硅胶柱、氨基柱、氰基柱等,烷烃+极性溶剂(如正己烷-乙醇)为流动相。
      反相色谱(RP-HPLC)——固定相极性<流动相极性。最常用色谱柱为ODS柱,甲醇-水或乙腈-水为流动相。
      反相离子抑制色谱(RP-ISC)——在流动相中添加少量弱酸、弱碱或缓冲液,调节流动相pH,抑制被测物的离解,增加被测物与固定相的疏水缔合作用,以改善峰形,获得高的柱效和良好的分离度。
      反相离子对色谱(RP-IPC)——在流动相中添加离子对试剂(为待测组分的反离子),在合适pH条件下与呈离解状态的被测组分作用,生成脂溶性的中性离子对结合物,以增大被测物在固定相中的分配系数,从而达到分离效果。常用的离子对试剂为烷基磺酸盐类和季铵盐类。

2. 系统适用性试验与要求

重复性:连续进样5针,峰面积的RSD应≤2.0%

灵敏度:通常以信噪比(S/N)表示。定量测定时,信噪比应不小于10

为符合系统适用性试验要求,可适当改变柱长度、内径、牌号、粒度、流动相流速、流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等。但不得改变固定相种类、流动相组成、检测器类型。

3. 定量方法——内标法、外标法。

4. 应用示例——阿司匹林泡腾片(外标法);重酒石酸去甲肾上腺素注射液(离子对色谱,外标法)。

二、气相色谱法

1. 气相色谱仪——由载气(如氮气)、色谱柱(填充柱、毛细管柱)、检测器(如FID,注意使用温度要求)、温控系统(进样口、柱温箱、检测器)等组成。

2. 测定方法与应用——内标法(维生素E测定)、外标法、标准溶液加入法。

三、毛细管电泳法

1.原理——两个重要迁移(电泳和电渗流)。

2.分离模式——毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳、毛细管等电聚焦电泳、胶束电动毛细管色谱、毛细管电色谱。

四、其它色谱

1.分子排阻色谱法——为分子筛机制,被测物按分子尺寸由大至小先后被洗脱。用于蛋白质多肽的分子量测定、生物大分子聚合物分子量与分子量分布的测定、高分子杂质测定(采用自身对照外标法计算供试品中高分子杂质的相对百分含量)。

2. 离子色谱法——离子交换原理。色谱柱——以键合了阴阳离子交换功能基的有机聚合物或无机载体为填充剂;洗脱液——为酸、碱溶液或缓冲液;检测器——最常用的是电导检测器。用于无机阴离子和无机阳离子、有机酸、糖醇类、氨基酸、蛋白质等分析。

3. 手性高效液相色谱法——常用方法:手性试剂衍生化法(CDR)、手性流动相添加剂法(CMPA)、手性固定相法(CSP)。

4. 色-质联用技术与应用——质谱仪由真空系统、进样系统(直接进样、接口技术)、离子源(EI、CI、ESI、APCI、MALDI等)、质量分析器(四极杆、离子阱、飞行时间、串联质谱等)、检测器(光电倍增器或电子倍增器)组成。常用联用技术:GC-MS、LC-MS。

3关键词

系统适用性试验;高效液相法;气相色谱法;毛细管电泳法;分子排阻法;离子色谱法;色-质联用